Práctica 2 (primer trimestre)

Determinación cuantitativa de hemoglobina (Drabkin)

Principio:

- La hemoglobina es oxidada por la acción del ferricianuro a metahemoglobina y mediante el ciunuro se convierte en cianmetahemoglobina.
La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de hemoglobina presente en la muestra ensayada.

Para que se utiliza:

- Cuando el nivel de hemoglobina aparece por debajo de los niveles normales indica anemia que puede ser causado por anemia primaria, cáncer, embarazo, enfermedades renales o hemorragias.

En cambio si el nivel es alto puede deberse a cardiopatías, deshidratación o estancia en lugares de gran altitud. 
El diagnóstico de este nivel debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de laboratorio.

Reactivos:

• Hemoglobin (reactivo drabkin) contiene residuos tóxicos y químicos.
• Hemoglobin calibrador

Muestra: Sangre venosa en bote con EDTA (morado)

Material:

• Cubetas
• Pipetas automáticas 
• Puntas de pipeta
• Gradillas
• Tubos de ensayo
• Tapones
• Agua destilada
• Vaso para desechos

Aparatos:

• Espectrofotómetro

Procedimiento:

- Preparamos tres tubos, uno para el blanco, otro para el patrón y otro más para la muestra.

• Tubo para blanco:

- 2,5 ml de RT (4,9 agua destilada + 2 gotas de reactivo)

• Tubo para patrón:

- 2,5 ml de RT + 10 ul de calibrador

• Tubo para muestra:

- 2,5 ml de RT + 10 ul de muestra

- Mezclamos todo y llevamos al baño durante 3 minutos.
- Leemos la absorbancia. El espectrofotómetro debemos encenderlo un poco antes, para que se vaya calentando.
- Primero calibramos con el blanco, vertemos un poco de producto del tubo 1, en una cubeta, metemos en el espectrofotómetro.
Seguidamente medimos la absorbancia del patrón y muestra.

Resultados: 

- El patrón nos da 1,032 de absorbancia y la muestra 0,441.
- Hacemos el cálculo (muestra/patrón x 15) 0,441/1,032 x 15= 6,40 g/dl de hemoglobina en la muestra.

 

Madeleine Guerra Delgado 2ºLCB