Práctica 12 (2ºTRI): Determinación de Coombs directo en tubo

Determinación de Coombs directo en tubo

Con esta práctica se busca determinar la existencia o no de Ac irregulares o incompletos fijados en la membrana de los hematíes del paciente.

Materiales:

• Pipetas automáticas 
• Puntas de pipeta
• Cubo para desechos
• Tubos de ensayo de 3 ml
• Pipetas pasteur

Muestra:

• Sangre anticoagulada (hematíes RH+)

Reactivos:

• AGH y SF
• Hematíes control sensibilizados con IgG (industrial)

Procedimiento:

- Preparación de lavado de hematíes:

              A) En un tubo de 3 ml ponemos 0,5 ml de hematíes y terminar de llenarlo con SSF, ponemos tapón.

              B) Llevamos a centrifugar a 2000 rpm durante 5 minutos.
              C) Repetimos los pasos anteriores una vez más.

- Técnica

1. Cogemos 50 ul de la sangre al 5% + lavado de hematíes + 500 ul de SSF, en un tubo.
2. Echamos 4 gotas de AGH (bote líquido verde) en otro tubo.
3. Echamos 4 gotas de la suspensión de hematíes (preparado en paso 1) en tubo anterior.
4. Centrifugamos el tubo a 2000 rpm durante 1 minuto.
5. Resuspendemos el tubo dando pequeños golpe en la mesa y leemos.