Práctica 20 (2ºTRI): Hemoglobina

Hemoglobina

Drabkin. Colorimétrico

Principio:

La Hb se oxida con el ferricianuro a metahemoglobina y con el cianuro se convierte en cianmetahemoglobina.

Significado:

La Hb tiene hierro y es lo que colorea la sangre. Transporta oxigeno a la sangre. Cuando los niveles están bajos indica anemia por diferentes causas. Debemos tener en cuenta los datos clínicos y de laboratorio para el diagnóstico.

Materiales:

• Pipetas automáticas 
• Puntas de pipeta
• Cubo para desechos
• Papel absorbente
• Tubo de ensayo 10 ml
• Cubetas para espectrofotómetro
• Tapones para tubos

Muestra:

• Sangre capilar o venosa

Aparato: 

• Espectrofotómetro a 540 nm

Reactivos:

• Hemoglobin 50x
• Hemoglobin CAL

Procedimiento:

1. Preparación del RT, En tres tubos ponemos 4,9 ml de agua destilada + 2 gotas de reactivo.
2. Lo primero que debemos de hacer es encender el aparato, para que se vaya calentando.
3. Preparamos 3 tubos: blanco, patrón y muestra.
4. En el blanco pipeteamos 5 ml de RT
5. En el patrón 5 ml de RT + 20 ul de hemoglobin CAL. Mezclamos
6. En la muestra 5 ml de RT + 20 ul de muestra. Mezclamos 
7. Incubamos durante 3 minutos a temperatura ambiente.
8. Leemos la absorbancia con el espectrofotómetro. Primero el blanco para calibrar, luego patrón y por último muestra.
9. Apuntamos todo y hacemos los cálculos correspondientes.

Patrón: 0,396  Muestra: 0,317

Cálculo: 0,396/0,317 x 15 = 18,74 g/dL de hemoglobina en la muestra.

*El resultado final se ve alterado (más alto) porque la muestra fue insuficiente.